心心念念的周四又來了，不久前亞科因的組織了一場如火如荼的免疫病理實驗學習，激起了不少好奇寶寶們的學習興趣。大家紛紛留言，病理實驗里面還有免疫組化、病理檢測等方面的內容，還有很多病理知識沒有給大家展現出來。看到大家留下的問題，小編在后續將會在亞科因微信平臺，一一為大家揭曉。在這一期，小編將會從淺入深，從組織切片的知識開始為大家展開。
說到組織切片，大家就會有許多疑問了，下面就對大家的疑問進行逐一解析：
- 什么是組織切片呢？
切片(qie?pian)玻片標本的一種。供光學顯微鏡或電子顯微鏡觀察的動植物組織薄片。因要求不同，可用刀片進行徒手切片，也可將組織塊包埋于石蠟或火棉膠中或以低溫冰凍，用切片機切片。切成5~10微米薄片，供光學顯微鏡觀察。用環氧樹脂或甲基丙烯酸包埋組織塊切制的超薄切片，其厚度在20~50納米，專供在電子顯微鏡下觀察。一般教學用的如根尖、莖的切片通稱石蠟切片。
- 組織切片的實驗步驟包括哪些環節呢？
- 組織切片的組織標本的初始形態是什么樣子？
組織塊的大小:所取組織塊較理想的體積為2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均勻地滲入組織內部，但根據制片材料和目的不同，組織塊的較理想體積也不同，如制作病理外檢、科研切片，其組織塊可以薄取0.1~0.2cm即可，這樣可以縮短固定脫水透明的時間，若制作教學切片厚取0.3 ~0.5cm，這樣可以同一蠟塊制作出較多的教學切片。
- 如何進行組織脫水透明？
標本經過固定和沖洗后，組織中含有較多的水分，必須將組織塊內的水分置換出來，這一過程叫做脫水。無論是用石蠟切片，還是用火棉膠切片，都必須除去組織中所含水分，因含水組織與石蠟、火棉膠等包埋材料不相容，常用的脫水劑為一系列不同濃度的乙醇。
脫水的步驟是:80%、90%、95%、100%各種濃度乙醇2小時，此過程可用脫水機自控完成。
丙酮也是一種脫水能力很強的脫水劑，但因其脫水能力很強，對組織有劇烈收縮作用，在制作科研、教學切片時一般不用該試劑。因乙醇、丙酮等不溶于石蠟，還要經過一個能溶于石蠟的溶劑替代過程稱為透明。常用的透明劑有二甲苯、三氯甲烷、水楊酸甲酯等。
- 如何進行浸蠟、包埋、切片、貼片？
(1)修整蠟塊:可視其組織的大小，在組織邊緣約0.1~0.2cm處，切去余蠟部分，否則易造成組織皺縮不平。
(2)準備好切片用具:切片刀、毛筆、眼科鑷子(彎)、漂烘溫控儀
(3)安裝蠟塊:將修好的蠟塊安裝在金屬或木制持蠟器上。
(4)安裝切片刀:將切片刀安裝在切片機的刀臺上，把刀臺上的緊固螺絲旋緊，使切片時不產生振動，能保持一定的切片厚度。
(5)切片的厚度:切片機的厚度調節器上刻有0~50μm或0~25μm，可任意選擇其厚度，石蠟切片的厚度一般在4~6μm。
(6)切片
(7)鋪片:用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在40~45℃的水面上，借水的張力和水的溫度，將略皺的蠟帶自然展平。
(8)貼片、烘片:待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中段處傾去載玻片上的余水，置入60~65℃恒溫箱內或切片漂烘溫控儀的烘箱內烤片15~30分鐘，脫去溶化組織間隙的石蠟。
如圖為一套石蠟切片的實驗裝置：浸蠟包埋機、切片機、攤片機。
如圖為石蠟切片的標準操作手法
- 如何提高組織切片水平？
1）病理儀器是必備條件：選擇合適的切片機是實驗的首要因素；
2）待切樣品的質量是關鍵因素：樣品質量取決于前期處理工作的準確無誤，包括固定、脫水、包埋等；
3）型號的匹配：合適的鋼刀或一次性刀片;切片時需認真考慮樣品類型、大小、厚度，兼顧操作者的便利性和舒適性；
4）操作者豐富的經驗必不可少：操作者必須懂得切片機的工作原理，對機器進行精細調節以達最佳效果;能應對常見故障，消除一些潛在的影響因素；
5）常見故障的排除：如切片機刀片的角度，包埋塊的溫度和硬度，刀片上是否有缺口或雜質附著等。
本期主要講的是組織切片的知識，時間有限，小編又得跟大家說再見了。下期同一時間，還有病理實驗的操作小技巧與大家見面。歡迎大家留言與提問。
歡迎廣大“因粉”多多關注，還會有很大科研驚喜等著大家喲。同時，Abbkine的技術專家為了給廣大讀者提供學習生物知識的平臺，經過不懈努力，將多種高端生物實驗的干貨整理出來，后期陸續在微信公眾號中刊登，請廣大熱愛科學的讀者持續關注Abbkine公眾號（Abbkine）。
Abbkine專注于蛋白學和細胞學領域，致力于創新和研發各類抗體、蛋白質、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學研究發展、藥物研發等領域的關鍵推動者。我們為您提供蛋白和免疫研究用戶最喜愛的產品，從免疫學基礎產品，如蛋白提取定量，到免疫學實驗的內參標簽抗體、一抗及二抗等；細胞研究用戶最喜愛的產品，從用于檢測細胞狀態的染料及試劑盒，細胞器提取試劑盒，細胞亞結構染色示蹤及細胞代謝檢測產品，到用于細胞培養的細胞因子及蛋白類檢測試劑盒，只為助力您的研究事業！
