T細胞增殖,流式如何檢測?

 

T淋巴細胞

T淋巴細胞特異性識別抗原后,可被雙活化信號刺激后,通過信號轉導啟動有關基因轉錄,進而發生增殖,這是淋巴細胞的基本功能,反映了其對抗原的識別和發生免疫應答的能力。而流式細胞術,就是最常用的檢測T淋巴細胞活化增殖的方法。

 

如何使用流式,簡單快捷的檢測活化的血樣中T淋巴細胞的增殖反應呢?

 

作為專業的流式抗體與解決方案,艾美捷科技,為您推薦流式科研與診斷方案領導者EXBio的T淋巴細胞增殖反應檢測試劑盒(T-cell BlastoFlowEx Kit)

EXBio

T淋巴細胞增殖反應檢測試劑盒 T淋巴細胞增殖反應檢測試劑盒
T-cell BlastoFlowEx Kit
貨號:ED7642
規格:100 test
反應種屬
應用類型 流式細胞術,FC
試劑盒原理 該試劑盒使用抗CD3和抗Ki67抗體混合物檢測增殖的淋巴細胞。

 

試劑盒組分:

組分 名稱 形式 說明
ED7642-1 固定與裂解液 10X濃縮液 稀釋至1X后,每次實驗加2ml
ED7642-2 破膜劑 10X濃縮液 稀釋至1X后,每次實驗加0.5ml
ED7642-3 EDTA 即用型 每次實驗加25ul
ED7642-4 CD3 PC/Ki-67 PE抗體預混液 即用型 每次實驗加50ul

 

實驗流程:

  1. 從培養箱中取出試管,取下并丟棄管蓋。每管中加入25 ul EDTA溶液,混合。
  2. 在37℃下孵育10分鐘。
  3. 加入2ml的PBS,混合。400g離心細胞5分鐘,移除上清液。
  4. 輕輕搖動管子擾亂沉淀。加入2ml的稀釋固定和裂解溶液,混合。室溫下孵育10分鐘。
  5. 400g離心細胞5分鐘,移除上清液。
  6. 加入0.5ml稀釋的破膜溶液,混合。室溫下孵育10分鐘。
  7. 加入2ml的PBS。400g離心細胞5分鐘,移除上清液。
  8. 加入50 ul的CD3/Ki-67 PE抗體預混液,混勻,室溫下孵育至少30分鐘。
  9. 加入2ml PBS。400g離心細胞5分鐘,移除上清液。
  10. 用0.1-0.3ml的1%甲醛PBS溶液或者稀釋的固定和裂解液(1份固定裂解液液+9份PBS的緩沖液)重懸細胞。在2-8℃下暗室條件下儲存處理后的樣品,直到分析。

 

結果展示:

1.用巨細胞病毒 -IE-1蛋白抗原肽體外刺激巨細胞病毒陽性供體全血

1.巨細胞病毒 -IE-1蛋白抗原肽體外刺激巨細胞病毒陽性供體全血

 

2.用巨細胞病毒 pp65抗原肽體外刺激巨細胞病毒陽性供體全血

 

巨細胞病毒 pp65抗原肽體外刺激巨細胞病毒陽性供體全血

3.全血在植物血凝素(PHA)管(貨號:ED7634)中刺激,用T細胞BlastoFlowEx試劑盒處理并在流式細胞儀中進行分析。 CD3 + /單細胞的目標亞群顯示為PE熒光的直方圖。根據刺激陰性對照管(貨號:ED7637)確定Ki-67陰性峰和Ki-67陽性峰之間的區分線。

 

全血在植物血凝素(PHA)管(貨號:ED7634)中刺激

 

【說明性】更加詳細的操作指南與分析指南,請點擊說明書下載

 

EXBIO是捷克一家著名的生物試劑公司,專注于流式細胞術配套試劑的開發。自1990年成立以來,EXBIO公司研發和制造的抗體分銷全球。目前,EXBIO可提供超過4000種質優、價廉的研究和臨床應用抗體,涵蓋了血液學,免疫學,癌癥,干細胞和細胞生物學等領域,如:CD分子、細胞粘附分子、細胞骨架、凋亡、細胞信號傳導、腫瘤標志物、人血型、HLA、生殖等研究用抗體,涉及熒光染料如FITC、PE、PE-Cy5、PE-Cy7、APC、PerCP、PerCP-Cy5.5、Pacific Blue、Pacific Orange、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 700、Biotin等多達13種,滿足客戶各類實驗需求。

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