核酸定量哪家強?熒光探針VS分光光度法

 

DNA編碼所有的遺傳信息,是創造所有生物生命的藍圖。它充當允許遺傳物質在世代之間傳遞的存儲設備。而RNA充當讀取DNA中存儲信息的讀卡器。DNA中存儲的遺傳信息由RNA攜帶,同時RNA充當核糖體的信使,并在核糖體中合成蛋白質。分子生物學這整個過程稱為“中心法則”。

 

DNA編碼

 

基于核酸的檢測的范圍繼續擴大,關于選擇核酸檢測方法有很多。

 

目前常用的是分光光度法,分光光度法利用了核酸的紫外吸收特性。核酸,包括DNA和RNA,均由脫氧核糖或核糖、磷酸基及含氮堿基構成。其中,由于堿基含有芳香環結構,因此具有紫外吸收的特性。通過測定260nm處的吸光度,對DNA和RNA進行定量。與此同時,還能通過計算OD260/OD280估計核酸的純度。由于此法不具有選擇性,無法區分DNA、RNA或蛋白質。檢測數值極易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機化合物)和堿基組成差異的影響。

 

今天給大家介紹熒光染料法,AAT開發的多款熒光染料可以特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA相結合,并在特定波長光源的激發下,發出熒光,這一系統不會檢測到樣本中可能存在的其他雜質分子,熒光強度與樣品中的靶分子濃度相對應。

 

DNA和RNA定量試劑

 

Helixyte Green dsDNA定量試劑(17597)和StrandBrite?Green RNA定量試劑(17611)分別對雙鏈DNA和單鏈RNA進行了優化。它們對核酸有很高的親和力,對結合核酸有極大的熒光增強作用,使得在幾分鐘內直接檢測復雜溶液中微量核酸成為可能,而且一般不會受到其他生物分子的干擾。

DNA和RNA定量試劑

圖1.小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen??具有幾乎相同的性能。

 

Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑,與dsDNA結合后可顯著增強熒光。它具有與PicoGreen?相同的光譜特性,因此是PicoGreen?的絕佳替代品(PicoGreen?是Invitrogen的商標)。它是可用于定量溶液中DNA的最敏感的染色劑之一。使用Helixyte Green,您可以在ssDNA,RNA和游離核苷酸存在的情況下選擇性地檢測低至25 pg / ml的dsDNA。該測定法在三個數量級上是線性的,并且幾乎沒有序列依賴性,使您能夠準確地測量來自多種來源的DNA,包括基因組DNA,病毒DNA,微量制備DNA或PCR擴增產物。

 

在進行Northern雜交分析、S1核酸酶分析、RNase保護分析、cDNA文庫制備、反轉錄PCR之前,檢測和定量少量RNA對于多種分子生物學過程非常重要,例如測量體外轉錄RNA的產量和測量RNA濃度。測量核酸濃度最常用的技術是在260nm處測定吸光度,吸光度法的主要缺點是蛋白質、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物的干擾,但使用敏感的熒光核酸試劑可以緩解這種干擾問題。StrandBrite RNA定量試劑是一種用于溶液中RNA定量的超靈敏熒光核酸染料。StrandBrite RNA定量試劑可以用熒光酶標儀或熒光分析儀檢測到低至5ng/mL的RNA。

 

Helixyte?Green?dsDNA和StrandBrite Green RNA探針的優勢:

 

  • 高靈敏度:Helixyte?Green和StrandBrite?Green的靈敏度比UV吸收率測定法高10,000倍
  • 選擇性高:與紫外吸收的測量不同,這些檢測不受蛋白質,游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響,從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復雜混合物(例如血清或全血)中更加準確。
  • 操作簡單:這些檢測方法非常簡單,不需要分離步驟,因此非常適合自動化,高通量篩選
  • 檢范圍廣:對于Helixyte Green的檢測,定量在四個數量級內都是準確的。基于StrandBrite 的熒光檢測在三個數量級上都是準確的。

 

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貨號 產品名稱 規格
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17530 細胞核染料Hoechst 33342 CAS 23491-52-3 100 mg
17533 細胞核染料Hoechst 33342 CAS 23491-52-3 1 g
17537 細胞核染料Hoechst 34580 CAS 911004-45-0 5 mg
17597 Helixyte Green 雙鏈DNA定量試劑 1 ml
17598 Helixyte Green 雙鏈DNA定量試劑 10 ml
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17651 Helixyte Green 雙鏈DNA熒光定量試劑盒 200 tests

 

RNA定量相關產品:

 

貨號 產品名稱 規格
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17611 StrandBrite 綠色RNA定量試劑*200X DMSO溶解 10 ml
17655 StrandBrite 綠色熒光RNA定量試劑盒 適合于酶標儀 1000 tests
17656 StrandBrite 綠色熒光RNA定量試劑盒 100 tests
17657 StrandBrite 綠色熒光RNA定量試劑盒 高選擇性 100 tests

 

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